(一)準(zhǔn)備工作

1.在開(kāi)始工作以前，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。

2.將所有必需的物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進(jìn)出前面開(kāi)口的次數(shù)。物品放置要注意以下幾點(diǎn)：

①II級(jí)生物安全柜臺(tái)面前面和后面的進(jìn)氣格柵不能被物品阻擋。

②所有物品應(yīng)盡可能地放在工作臺(tái)后部靠近工作臺(tái)邊緣的位置，并使其在操作中不會(huì)阻擋后部格柵。

③可產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備(如：混勻器、離心機(jī)等)應(yīng)靠近安全柜的后部放置。有生物危害性的廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子等體積較大的物品，應(yīng)該放在安全柜內(nèi)的某一側(cè)。

④潔凈的物品應(yīng)放置在距離產(chǎn)生氣溶膠器皿至少15 cm外，降低交叉污染的可能性。

⑤容易受紫外線損傷的實(shí)驗(yàn)樣本可以在紫外線殺菌后的實(shí)驗(yàn)之前放入。

⑥不要在工作區(qū)內(nèi)排放過(guò)多的物品。

3.關(guān)閉操作前窗，打開(kāi)生物安全柜的紫外燈，對(duì)生物安全柜工作臺(tái)面，側(cè)壁表面以及后壁內(nèi)側(cè)進(jìn)行殺菌處理。

4.稍微打開(kāi)操作前窗，讓生物安全柜工作區(qū)排氣幾分鐘之后再開(kāi)始工作。

(二)操作注意事項(xiàng)

1.在使用生物安全柜時(shí)應(yīng)穿著個(gè)體防護(hù)服并戴手套防止被污染。在進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)生物安全水平的操作時(shí)，可穿著普通實(shí)驗(yàn)服。手套應(yīng)套在實(shí)驗(yàn)服袖口外面。有些操作可能還需要戴口罩和護(hù)目鏡。

2.在生物安全柜內(nèi)，避免使用酒精燈等明火滅菌器。使用明火會(huì)對(duì)氣流產(chǎn)生影響，并且在處理?yè)]發(fā)性物品和易燃物品時(shí)，也易造成危險(xiǎn)。在對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌時(shí)，可以使用紅外線電加熱器(見(jiàn)圖1),或者干脆使用一次性塑料接種環(huán)。

3.手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約1min,以便安全柜調(diào)整完畢并且讓里面的空氣“掃過(guò)"手和雙臂的表面以后，才可以開(kāi)始對(duì)物品進(jìn)行處理。

4.工作時(shí)，盡量減少手臂的移動(dòng)，移動(dòng)時(shí)要緩慢，防止干擾柜內(nèi)氣流。在移動(dòng)雙臂進(jìn)出安全柜時(shí)，需要小心維持前面開(kāi)口處氣流的完整性，雙臂應(yīng)該與工作區(qū)開(kāi)口垂直地緩慢進(jìn)出前面的開(kāi)口。

5.在工作臺(tái)面上的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進(jìn)行，所有操作在工作臺(tái)面的中后部進(jìn)行。

6.工作時(shí)，耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤放在安全柜內(nèi)不能拿出安全柜，否則在使用這些物品時(shí)雙臂就必須頻繁進(jìn)出安全柜，這樣會(huì)干擾安全柜空氣屏障的完整性，從而影響對(duì)人員和物品的防護(hù)。

7.一旦實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生溢灑物，用消毒紙巾置于其表面吸附清理。

8.盡量使安全柜處于持續(xù)工作狀態(tài)，并對(duì)所有物品進(jìn)行表面消毒處理，提供大程度的人員保護(hù)。從安全柜內(nèi)部拿取可能產(chǎn)生污染的物品時(shí)，一定要進(jìn)行表面消毒處理。

(三)使用完畢后的處理

1.系緊用過(guò)的生物廢物袋。

2.對(duì)安全柜內(nèi)壁、后壁、工作臺(tái)面和前窗內(nèi)側(cè)進(jìn)行清潔和消毒處理。

3.由于剩余的培養(yǎng)基可能會(huì)使微生物生長(zhǎng)繁殖，因此在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，包括儀器設(shè)備在內(nèi)的所有物品都應(yīng)清除表面污染，并移出安全柜。

4.從安全柜內(nèi)移出手臂之前，一定要進(jìn)行表面消毒處理，然后垂直于工作區(qū)開(kāi)口緩慢地移出。

6.在每次使用后，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里的任何微生物。在每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，應(yīng)擦拭生物安全柜的工作臺(tái)面、四周以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位來(lái)清除表面的污染。在對(duì)目標(biāo)生物體有效時(shí)，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來(lái)消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無(wú)菌水再次進(jìn)行擦拭。

7.關(guān)閉前操作窗口并開(kāi)啟紫外燈。

(四)生物安全柜內(nèi)溢灑的處理

處理溢灑物時(shí)不要將頭伸入安全柜內(nèi)，也不要將臉直接面對(duì)前操作口，而應(yīng)處于前視面板的后方。選擇消毒滅菌劑時(shí)需要考慮其對(duì)生物安全柜的腐蝕性。

如果溢灑的量不足1 ml時(shí)，可直接用消毒滅菌劑浸濕的紙巾(或其他材料)擦拭。

如果溢灑量大或容器破損，建議按如下操作：使生物安全柜保持開(kāi)啟狀態(tài)；在溢灑物上覆蓋浸有消毒滅菌劑的吸收材料，作用一定時(shí)間以發(fā)揮消毒滅菌作用，必要時(shí)，用消毒滅菌劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽；在安全柜內(nèi)對(duì)所戴手套消毒滅菌后，脫下手套；如果防護(hù)服已被污染，脫掉所污染的防護(hù)服后，用適當(dāng)?shù)南緶缇鷦┣逑幢┞恫课唬淮┖眠m當(dāng)?shù)膫€(gè)體防護(hù)裝備，如雙層手套、防護(hù)服、護(hù)目鏡和呼吸保護(hù)裝置等；小心將吸收了溢灑物的紙巾(或其他吸收材料)連同溢灑物收集到專用的收集袋或容器中，并反復(fù)用新的紙巾(或其他吸收材料)將剩余物質(zhì)吸凈；破碎的玻璃或其他銳器要用鑷子或鉗子處理；用消毒滅菌劑擦拭或噴灑安全柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側(cè)；作用一定時(shí)間后，用潔凈水擦干凈消毒滅菌劑；如果需要浸泡接液槽，在清理接液槽前要先報(bào)告主管人員；可能需要用其他方式消毒滅菌后再進(jìn)行清理。如果溢灑物流入生物安全柜內(nèi)部，需要評(píng)估后采取適用的措施。

(五)定期維護(hù)

1.每三個(gè)月更換一次預(yù)過(guò)濾器。

2.每年更換一次紫外燈。

3.有下列情況之一時(shí)，應(yīng)對(duì)生物安全柜進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)：生物安全實(shí)驗(yàn)室竣工后，投入使用前，生物安全柜已安裝完畢；生物安全柜被移動(dòng)位置后；對(duì)生物安全柜進(jìn)行檢修后；生物安全柜更換高效過(guò)濾器后；生物安全柜一年一度的常規(guī)檢測(cè)?，F(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)應(yīng)由有資質(zhì)的專業(yè)人員按照生產(chǎn)商的說(shuō)明對(duì)每一臺(tái)生物安全柜的運(yùn)行性能以及完整性進(jìn)行評(píng)估，以檢查其是否符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。安全柜防護(hù)效果的評(píng)估應(yīng)該包括對(duì)安全柜的完整性、HEPA過(guò)濾器的泄漏、垂直氣流的速度、工作窗口氣流流向和平均風(fēng)速、負(fù)壓/換氣次數(shù)、氣流的煙霧模式以及警報(bào)和互鎖系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)試。還可以選擇進(jìn)行漏電、光照度、紫外強(qiáng)度、噪音水平以及振動(dòng)性測(cè)試。在進(jìn)行這些測(cè)試時(shí)，檢測(cè)人員要經(jīng)過(guò)專門的培訓(xùn)，采用專門的技術(shù)和儀器設(shè)備。強(qiáng)烈建議由有資質(zhì)的專業(yè)人員來(lái)進(jìn)行測(cè)試。

每周采用空氣落菌數(shù)相似的方法進(jìn)行無(wú)菌檢查。

生物安全柜在移動(dòng)以及更換過(guò)濾器之前，必須清除污染。常用的方法是采用甲醛熏蒸,應(yīng)該由有資質(zhì)的專業(yè)人員來(lái)清除污染。